Обща информация
Протоонкогенът BRAF (хомоложен онкоген B1), разположен на 34-та позиция в дългото рамо на 7-ма хромозома, се състои от 18 екзона. Той кодира синтеза на ензима серин/треонин протеин киназа от семейството Raf кинази. Тези ензими са участващи във вътреклетъчния сигнален път Ras/Raf/MEK/ERK (MAPK/ERK), който предава сигнали от клетъчни рецептори (напр. EGFR – рецептор за епидермален растежен фактор) към ядрото на клетката. Тези сигнали имат роля в диференциацията, пролиферацията, стареенето и оцеляването на клетките. Този път на предаване на сигнала се активира конститутивно при много видове човешки злокачествени заболявания, обикновено в резултат на мутации в онкогените KRAS и BRAF.
BRAF генните мутации могат да бъдат два вида:
- наследствени (зародишна линия) – свързани с кардиофациокутанен синдром – рядко генетично състояние, характеризиращо се със сърдечни дефекти, умствена изостаналост и отличителен външен вид на лицето.
- придобити (соматични) – свързани с различни форми на рак (неходжкинов лимфом, колоректален рак, злокачествен меланом, папиларен рак на щитовидната жлеза, рак на белия дроб, различен от дребноклетъчен рак, рак на яйчниците). Около 7% от човешките злокачествени заболявания съдържат BRAF мутации.
Към днешна дата са идентифицирани над 50 различни мутации в гена BRAF, много от които са отговорни за увеличаване на активността на BRAF с 1.5 до 700 пъти, в зависимост от вида мутация на гена. От свързаните с тумора активиращи BRAF мутации най-често срещаният (отговорен за над 80% от случаите) е V600E, който предизвиква заместване на аминокиселината валин с глутаминова киселина в кодон 600 в сегмента активатор. Последицата от тази мутация е, че мястото за активиране на протеин киназата става открито (което е обикновено скрито в хидрофобна торбичка), което води до конститутивно активиране на BRAF. По този начин злокачествените клетки с мутация V600E се размножават независимо от растежен фактор. Мутацията също предразполага към инхибиране на апоптозата, повишена туморна инвазивност и е ранно събитие по време на канцерогенезата.
Тази мутация е идентифицирана при следните видове тумори:
- Папиларен рак на щитовидната жлеза
Мутацията V600E е най-честата генетична модификация при папиларен рак на щитовидната жлеза (~ 40-50% от случаите). След проучване, последвало за период от 15 години еволюцията на група пациенти с тази форма на рак, е било установено, че мутацията V600E е неблагоприятен прогностичен фактор, независим от другите клинични и патологични характеристики.
Мутацията е налице в около 50% от случаите на злокачествен меланом. Последните проучвания показват, че V600E е свързан с високорискова форма на заболяването (ранно начало, липса на хронично увреждане на кожата, намалена преживяемост) и следователно значението на терапевтичното инхибиране на мутантния Braf протеин.
- Недребноклетъчен рак на белия дроб
Честота на мутация от 1-4% се отчита при този вид рак. При тази форма на рак мутацията BRAF V600E е по-честа при жените, тъй като е свързана с агресивна хистологична форма и лоша прогноза.
Неотдавна публикувано проучване установи, че мутацията V600E е свързана с ранен стадий на тумори на яйчниците, ниска злокачественост и благоприятна прогноза. Наблюденията могат да повлияят на терапевтичния подход на пациенти с тази форма на тумори на яйчниците.
Генетичната мутация V600E наскоро беше описана като молекулярен маркер за Космато-клетъчната левкемия. Тъй като присъствието й е установено при повечето пациенти, се смята, че мутацията играе ключова роля в патогенезата на заболяването. Също така резистентните форми могат да се лекуват с инхибитори на BRAF.
Вътреклетъчният сигнален път MAPK / ERK често се нарушава при колоректален рак, като свръхекспресията на EGFR (рецептор за епидермален растежен фактор) се открива в приблизително 50% от случаите и активира мутации в гените KRAS и BRAF съответно в 30-50% и 10% от случаите.
Нормалните епителни клетки в дебелото черво, в еволюцията си към злокачествено заболяване, могат да следват няколко пътя:
- традиционната аденома-карциномна последователност, свързана с хромозомна нестабилност и характеризираща се с постепенно натрупване на мутации на специфични гени – APC, KRAS и TP53 – които предизвикват прогресивни диспластични промени на епитела на дебелото черво
- път, свързан с микросателитна нестабилност (MSI), BRAF мутации и обширно метилиране на ДНК
- път на „сливане“, свързан с метилиране на O-6 метилгуанин-ДНК-метилтрансфераза (MGMT), мутация на KRAS и инактивиране на гена, кодиращ туморния протеин р53 (TP53).
BRAF мутациите са наблюдавани главно при колоректален рак спорадично с микросателитна нестабилност. Те са открити по-често при премалигнени полипи на дебелото черво и в началото на колоректалния рак. Тъй като едновременното присъствие на мутации KRAS и BRAF е рядко при премалигнените полипи на дебелото черво и в ранните стадии на колоректален рак, те се считат за алтернативни мутации или взаимно изключващи се мутации.
И двете мутации KRAS и BRAF присъстват само по изключение при синдрома на Lynch (синдром на наследствен неполипозен колоректален рак – HNPCC). Мутацията BRAF V600E е идентифицирана в приблизително 70% от туморите с хиперметилиране на промотора MLH1. Важното е, че мутацията V600E досега не е идентифицирана при тумори, свързани с мутации на зародишна линия MLH1. По този начин изследването на мутацията BRAF V600E може да разграничи мутация на зародишна линия от соматично/епигенетично инактивиране MLH1.
Изследването на мутацията V600E при колоректален рак също има терапевтични последици. Тъй като Braf киназата се намира надолу по веригата от EGFR и KRAS в каскадата MAPK, туморите, съдържащи мутацията V600E с постоянно активиране на този път на трансдукция на сигнала, са устойчиви на всякакъв вид анти-EGFR терапия.
Следователно, преди лечение с инхибитори на EGFR тирозин киназа, е необходимо да се тества за наличието на мутация V600E в гена BRAF, за да се идентифицират правилно пациентите, които могат да се възползват от терапия.
Цел на изследването
Целта на изследването е идентифицирането на BRAF V600E мутации в ДНК на клетките от взетата за изследване туморна тъкан. Това е важно за диагностиката и лечението на съответното злокачествено заболяване.
Кога да направя това изследване?
Препоръки за изследване за мутация BRAF V600E:
- при метастатичен колоректален рак за подбор на пациенти, при които е подходящо да се прилага EGFR инхибитор (молекулярен маркер с предсказваща ефективност на отговор към лечението срещу EGFR)
- при скрининг за синдром на Lynch при микросателитни тумори, които демонстрират имунохистохимична загуба на експресия на протеин MLH1
- при злокачествен меланом за предвиждане на терапевтичния отговор от лечението с BRAF инхибитори или MEK
- при папиларен карцином на щитовидната жлеза за оценка на прогнозата.
Подготовка преди изследване
Не е необходима предварителна подготовка на пациента преди провеждане на изследването. Изследването на мутация BRAF V600E се извършва на взета предварително за имунохистохимичен анализ туморна тъкан посредством биопсия.
Проба
Неоцветени участъци от тъкан, запазени в парафин (4-5 блокчета). Трябва да бъдат отбелязани с помощта на маркер областите, в които се намира туморната тъкан
Метод
секвениране на екзон 15 на гена BRAF.
Референтни стойности
Липса на мутации BRAF V600E в ДНК на клетките от изследваната тъкан.
Интерпретация на резултатите:
Отчита се наличието или отсъствието на мутация BRAF V600E в ДНК, извлечена от туморната тъкан.
Тълкуването на получения резултат зависи от вида на туморната тъкан:
- При папиларен рак на щитовидната жлеза мутацията BRAF V600E е нов показател за прогресиране и агресия на заболяването.
- Пациентите със злокачествен меланом с мутация V600E могат да се възползват от лечението с инхибитори на EGFR (рецептор за епидермален растежен фактор)
- Туморите на дебелото черво, които се представят с хиперметилиране на промотор на MLH1 и мутация на BRAF V600E, са най-вероятно спорадични.
- Наличието на мутация V600E в гена BRAF е свързано с неблагоприятна прогноза и липса на отговор на анти-EGFR лечение при пациенти с метастатични тумори на дебелото черво.
ИНФО Вземи 5% отстъпка само онлайн:
| Изследване | Време за резултати (делнични дни) | Цена | Поръчай |
|---|
Инфо Научи повече:
Рак на кожата – меланом и XP-асоцииран рак
Рак на дебелото черво (колоректален рак)
Източници:
