Бласттрансформационен тест (LTT) за установяване на Т клетъчен имунен отговор към SARS-CoV-2
Медицинска информация
Важно: Бихме искали да знаете, че според настоящите наредби имунологичните находки като антитела срещу SARS-CoV-2 или специфичен за SARS Т-клетъчен отговор, не представляват право на „доказателство за имунитет“ пред официални органи (напр. гранична полиция, пътуване със самолет и т.н.).
Съдържание
Бласттрансформационен тест (LTT) за установяване на Т клетъчен имунен отговор към SARS-CoV-2
Досега рутинната лабораторна диагностика за установяване на имунитет след инфекция с новия коронавирус използва определянето на антителата към вируса SARS-CoV-2. Антителата могат да предотвратят инфекцията или да „подпомогнат“ елиминирането на патогени чрез неутрализиращи ефекти. Въпреки това, не всички пациенти развиват измеримо количество антитела след контакт с вируса, особено ако са били асимптоматични или при тях инфекцията протекла много леко (Mallapaty, 2020; Long et al., 2020).
В допълнение, научните данни показват, че отговорът на антителата след инфекция е краткотраен само в повечето случаи; подобно на SARS-CoV-1 през епидемията от 2003 г. Т-клетъчният отговор, от друга страна, играе централна роля в защитата срещу вируса, а Т-клетъчната памет може да продължи няколко години,
Възможното откриване на специфични за SARS-CoV-2 Т клетки представлява значително обогатяване на лабораторната диагностика на COVID-19. Бласттрансформационният тест (LTT) за SARS-CoV-2 е методически и клинично валидиран тест в Лаборатория IMD Берлин. Пациентските клетки се стимулират със специфични пептиди, смеси от малки фрагменти от имунодоминантния шипчест гликопротеин на вируса (S протеин). При LTT SARS-CoV-2 се използват пептидни смеси от 2 области. Те обхващат така наречения С-терминален регион (С-край) и N-терминален регион (N-край) на целия S протеин (Фиг. 1).
Фиг. 1. Стимулирането на Т лимфоцитите на пациента се извършва с „пептидна библиотека“ от 158 припокриващи се пептиди от N-терминалния регион или 157 пептида от С-терминалната област.
Специфика на LTT-SARS-CoV-2
Смята се, че N-терминален регион е много специфичен за SARS-CoV-2, докато С-терминалният регион има по-високи хомологии с други бета-коронавируси (Braun et al, 2020). Нашите резултати показват, че при контролна група лица (без прекарана инфекция, без наличие на антитела) не показват реакции към N-терминалния пептид. За разлика от това, около 20-30% от пациентите показват умерена реакция към зоната на С-термина. Изолирана реакция към С-терминалния участък може да е свързана с кръстосана реактивност към други бета коронавируси. Дали и какво влияние може да има такава кръстосана реакция върху хода на инфекция със SARS-CoV-2, все още е предмет на изследване.
Фиг. 2. Представяне на пептиди към Т клетките и последващо активиране. Най-важният сигнал за активирането на Т клетката е специфичното разпознаване на пептида от Т-клетъчния рецептор (TCR). Пептидът трябва да „пасне“ точно, така както ключ-ключалка. За пълно активиране Т клетката също се нуждае от допълнителни сигнали от антиген-представящата клетка. Този сигнал се осигурява in vitro чрез прилагане на анти-CD28 антитела.
Чувствителност на LTT-SARS-CoV-2
Всички лица, които са с доказана SARS-CoV-2 инфекция (PCR позитивни), изследвани в нашите проучвания, показват ясна реактивност както към N-, така и към C-пептидите. Дори 5 месеца след заразяването, изследването LTT все още е било позитивно за SARS-CoV-2.
На кои въпроси може да даде отговор изследването LTT SARS-CoV-2?
Имало ли е инфекция в миналото?
Тази индикация е важна при всички пациенти с несигурен (съмнителен) или предимно отсъстващ имунен отговор с антитела.
Пациенти, коитоса били PCRположителни, но нямат антитела, имат ли Т – клетъчен отговор срещу вируса?
Предполага се, че Т-клетъчният имунитет е свързан със силна имунна защита, дори при липса на откриване на антитела.
Около 10% от пациентите със симптоми и 40% от асимптоматичните пациенти губят своите IgG антитела във времето, така че предишна инфекция може да бъде доказана само чрез наличие на Т клетъчен отговор.
Откриваем ли е Т-клетъчен отговор към С-терминалните пептиди при неинфектирани преди това пациенти (ако няма отговор към силно специфичния N-терминален регион)?
Констелация от умерен имунен Т клетъчен отговор и наличие на Т-клетъчна памет само към С-крайната област на шипчестия протеин, но не и към SARS-CoV-2-специфичната N-терминална област. Според настоящите проучвания тази констелация от констатации се среща при приблизително 30% от неинфектираните, тъй като С-терминалната област има по-висока хомология с последователносттите на ендемичните циркулиращи коронавируси. Такава констатация говори за липса на инфекция със SARS-CoV-2, но показва кръстосана реактивност и по този начин възможен „частичен имунитет“. Такава кръстосана реактивност може да има към няколко ендемични циркулиращи коронавируси на „настинката“ (229E, OC43, NL63 и HUK1). Съществува хипотеза, че тази кръстосана реактивност може също да медиира поне частичен имунитет срещу SARS-CoV-2. Това би било възможно обяснение за факта, че някои лица не се разболяват следмконтакт или прекарват заболяването само с леки симптоми. За окончателна констатация по този въпрос обаче трябва да се изчакат допълнителни текущи проучвания.
Материал за изследването
20 ml кръв в епруветки с хепарин и 5 ml кръв за серум в епруветка без антикоагулант.
Пробите се изпращат в IMD в рамките на 24 ч. Кръвта се съхранява и транспортира при стайна температура.
ВАЖНО ЗА ВСИЧКИ LTT ТЕСТОВЕ
Кръв за изследането се взима само в четвъртък по следния график:
Харманли, Хасково и Димитровград – до 10:00 часа
Чирпан – до 12:00 часа
Стара Загора – до 11:00 часа
Пловдив-до 12:00 часа
София – до 13:30 часа
Препоръчително е да не са използвани кортикостероидни лекарства (напр. кортизон), цитостатични лекарства, имуносупресори 10 дни преди взимането на кръвните проби.
Long, Q.X., Tang, X.J., Shi, Q.L., Li, Q., Deng, H.J., Yuan, J., Hu, J.L., Xu, W. Zhang, Y., Lv, F.J., et al. (2020). Clinical and immunological assess- ment of asymptomatic SARS-CoV-2 infections. Nat Med.
Mallapaty, S. (2020). Will antibody tests for the coronavirus really change everything? Nature 580, 571-572.
Channappanavar, R., Fett, C., Zhao, J., Meyerholz, D.K., and Perlman, S. (2014). Virus-specific memory CD8 T cells provide substantial protection from lethal severe acute respiratory syndrome coronavirus infection. J Virol 88, 11034-11044.
Braun, J., Loyal, L., Frentsch, M., Wendisch, D., Georg, P., Kurth, F., Hippen- stiel, S., Dingeldey, M., Kruse, B., Fauchere, F., et al. (2020). SARS-CoV-2-reactive T cells in healthy donors and patients with CO VID-19. Nature.
